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流式细胞仪(FlowCytometry,FCM)是一种在液流中快速检测细胞特性的技能。流式间标染色是一种常用的染色办法,用于符号和区别细胞的不同亚群。以下是流式间标染色的根本步票:
1.细胞样品预备:从待检测的安排或细胞中搜集细胞。假如是体外培育细胞,直接用CellStainingBuffer重悬细胞后进行下一步操作。
2.细胞洗刷和裂解:将搜集的细胞用CellStainingBuffer洗刷,去除杂质和死细胞。若需求裂解红细胞,可以将10X红细胞裂解液稀释到1X,然后用3m该工作液重悬细胞,在冰上孵育5分钟。然后参加10mlCellStainingBuffer洗刷细胞,去除未裂解的红细胞。
3.抗体染色:依据试验需求,挑选恰当的抗体进行染色。将抗体与细胞混合,充沛孵育。使抗体与细胞表面抗原结合。
4.洗刷和固定:用CellStainingBuffer洗刷细胞,去除未结合的抗体。若需求固定细胞。可以正常的运用1%的PFA(聚甲醛)进行固定。
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